背景：血小板含有多种生长因子、抗炎因子、细胞因子、神经递质和抗氧化剂。最近的临床前研究强调了人血小板裂解液（HPL）在再生医学中的治疗潜力，尤其是在治疗一系列中枢神经系统（CNS）神经退行性疾病和创伤方面。血小板来源的外泌体（PEVs）在HPL中含量丰富，可能在神经保护方面发挥特定作用，但这一作用仍需确定。
目的：本研究旨在揭示从血小板浓缩物（PC）上清液中分离出的PEVs的组成，并评估其在细胞和动物模型的创伤性脑损伤（TBI）和帕金森病（PD）中促进受损神经元恢复和提供神经保护的潜力。
方法：我们从台北血液中心（台北关渡）获得了过期的临床级血小板分离产物。将PC以3000g离心30分钟使血小板沉淀。回收血浆上清液并以6000g离心10分钟以去除细胞碎片，随后通过18℃下25000g高速离心90分钟分离PEVs，并将其悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS）中。使用生物物理、生物化学、显微镜和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）蛋白质组学技术表征PEVs，以阐明其生物特性。在体外，使用SH-SY5Y神经元细胞、LUHMES多巴胺能神经元和BV2小胶质细胞评估其功能。在体内，通过鼻腔（i.n）给药于受控皮质撞击（CCI）-TBI小鼠模型，评估PEVs减少神经炎症的能力。使用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）评估炎症标志物（Gfap、Cd68、Trem2、Ccl4、Tlr2、Tnf-α）的水平。此外，还通过活动度行为测试和检测黑质（SN）中酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞表达的免疫组织化学分析，在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的PD小鼠模型中评估其神经保护活性。
结果：PEVs的大小在50至350nm之间，多数在200nm左右，浓度在1010至1011/mL之间。它们表达血小板和外泌体标志物，并显示出冷冻电子显微镜观察到的脂质双层结构。值得注意的是，促凝血磷脂酰丝氨酸的表达降低。LC-MS/MS揭示了PEVs内含有多种营养因子，包括神经营养因子、抗炎因子、神经递质和抗氧化剂，表明其具有多方面的生物学功能。PEVs在体外促进了SH-SY5Y细胞的神经恢复和成熟，对LUHMES细胞中的erastin诱导的铁死亡表现出神经保护作用，并在小胶质细胞中促进了抗炎反应，特别是在炎症条件下。体内实验表明，鼻腔给药的PEV具有治疗潜力，在TBI小鼠模型中表现出强大的抗炎作用，Gfap和Tnf-α水平显著降低。此外，它们还改善了运动功能，如饲养行为测试所示，并保留了MPTP处理小鼠黑质中多巴胺能神经元的TH表达。
总结/结论：数据证实了从PC上清液中分离的PEVs具有作为中枢神经系统生物疗法的神经保护潜力。这些发现为治疗脑创伤和神经退行性疾病开辟了新的可能性，支持进一步的转化研究。
翻译：于颖萱 嘉兴市中心血站
审核专家：王拥军
翻译来源：https://www.isbtweb.org/events/isbt-barcelona-2024/abstracts-barcelona.html P322
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